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相差显微镜在使用过程中要注意的几个问题

时间:2020-07-24 15:17 点击次数:
 
相差显微镜

相差显微镜使用中注意的几个问题:
 
(1)当图像的光暗对比度相反时,相位反转被称为相位反转,当相位差δ=0时,对比度随着δ的增加而增大,当δ继续增大到一定值时,相位反转就会发生。当使用90%高吸光度(高对比度)物镜时,转换值约为0.55λ,70%标准吸收值约为0.33λ。高吸收率的物镜应用来区分较小的光程差。
 
(2)在相差显微镜成像过程中,当某一结构因相位延迟而变暗时,不是光的丢失,而是光在图像平面上重新分布的结果。因此,在黑暗区域明显消失的光线将在较暗的物体周围出现明亮的光晕。这是相差显微镜的缺点,阻碍了精细结构的观察,当环形膜片很窄时,光晕现象更为严重。相位对比度显微镜的另一种现象是衰落效应,即当相位延迟在较大区域内相同时,相位对比度显微镜边缘的对比度下降。
 
(3)当进行差分观测时,样品的厚度应为5μm或更薄,当使用较厚的样品时,样品的上层非常清晰,深层会模糊,会产生相移干扰和光散射干扰。
 
(4)盖板的滑动和滑动的影响必须用玻璃板覆盖,否则环形隔膜的亮环和相板的暗环不重合,差观测对滑块和盖板的玻璃质量也有很高的要求。当有划痕、不均匀厚度或不均匀厚度时,会产生亮环偏斜和相位干涉。此外,当滑块太厚或太薄时,环光圈亮环就会变大或变小。
 
 
 

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